分享一篇關(guān)于小鼠乳腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)步驟

　　今天為大家分享一篇關(guān)于小鼠乳腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)步驟，話不多說下面一起來(lái)了解一下吧。
 

　　一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
 

　　1)準(zhǔn)備培養(yǎng)基，90%;上等胎牛血清，10%。
 

　　2)培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
 

　　3)凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
 

　　二.細(xì)胞處理：
 

　　1)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。**天換液并檢查細(xì)胞密度。
 

　　2)細(xì)胞傳代：小鼠乳腺癌細(xì)胞如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 

　　對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
 

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
 

　　2.加2ml消化液于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
 

　　3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 

　　4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 

　　3)細(xì)胞凍存：小鼠乳腺癌細(xì)胞待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。