非經(jīng)典分泌途徑在細菌中普遍存在,能夠分泌不具有典型信號肽的蛋白。枯草芽孢桿菌利用非經(jīng)典分泌途徑可分泌多種細胞質(zhì)蛋白,但其分泌機制知之甚少。目前在非經(jīng)典分泌途徑研究中有多個*的熱點問題:非經(jīng)典蛋白分泌的通道挖掘;非經(jīng)典蛋白分泌的選擇機制,非經(jīng)典蛋白如何定位,非經(jīng)典蛋白分泌對菌株具有怎樣的生理意義等。
中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所研究員張大偉帶領(lǐng)的蛋白質(zhì)合成細胞工廠與微生物代謝研究團隊,以外源非經(jīng)典分泌蛋白RDPE(阿洛酮糖異構(gòu)酶)為模式蛋白,研究了該蛋白在枯草芽孢桿菌中的分泌機制。通過分析目標蛋白RDPE在菌體生長時期的分泌效率,發(fā)現(xiàn)該蛋白的分泌并不是簡單的細胞裂解。同時對蛋白RDPE 的N端、C端及疏水性區(qū)域進行了一系列突變,發(fā)現(xiàn)這些區(qū)域?qū)Φ鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性及分泌能力起著重要作用。
研究還發(fā)現(xiàn),只有完整的四聚體蛋白RDPE才可引導(dǎo)報告蛋白GFP分泌,推測蛋白RDPE以四聚體形式分泌。通過檢測交聯(lián)的四聚體分泌能力,發(fā)現(xiàn)RDPE以四聚體單位在胞內(nèi)形成然后分泌到胞外。研究團隊隨后對枯草芽孢桿菌中的12種內(nèi)源非經(jīng)典分泌蛋白的結(jié)構(gòu)進行了研究,其中10種蛋白在胞內(nèi)外以多聚體形式存在(三聚體,五聚體,七聚體等),并且這些蛋白聚集在細胞的兩極及隔膜區(qū)域。綜上所述,非經(jīng)典分泌途徑傾向于分泌多聚體蛋白,這也是關(guān)于蛋白多聚體分泌的報道,闡釋了非經(jīng)典分泌途徑的選擇機制。
蛋白突變實驗說明多聚體是形成穩(wěn)定構(gòu)型并通過非經(jīng)典途徑分泌的重要條件
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